甲氧西林包括哪些药 甲氧西林
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最低抑菌浓度(MIC)测定用GPS-109药敏鉴定卡在Vitek32全自动微生物分析/药敏系统测定甲氧西林MIC,遵循美国临床和实验室标准化研究所CLSI制定的判断标准。
头孢西丁纸片扩散试验按CLSI推荐的Kirby-Bauer法进行,菌液浓度0.5麦氏浊度(1.5×108CFU/ml)。结果判断标准:金黄色葡萄球菌抑菌圈直径≤19mm为耐药,≥20mm为敏感,凝固酶阴性葡萄球菌抑菌圈直径≤24mm为耐药,≥25mm为敏感。
PCR检测mecA基因挑取菌落置入内含有100μl生理盐水的0.5mL离心管内,离心(15000r/min)5min吸弃上清液加裂解液A(0.5%非离子去污剂)50μl和裂解液B(200ug/ml蛋白酶K)5μl置55℃保温1h后置入95℃保温5min。离心(10000r/min)30s,上清液即为模板。PCR引物序列P1(5’-GCAATCGCTAAAGAACTAAG-3’),P2(5’-AATGGGACCAACATAACCTA-3’),PCR反应体系50μl,热循环参数为:94℃预变性5min,94℃1min,48℃1min,72℃1min,循环30次,72℃延伸10min,PCR扩增产物做2%琼脂糖凝胶电泳,紫外凝胶电泳成像仪下观察,以224bp处出现荧光条带为mecA基因阳性。金葡菌ATCC25923作为阴性对照,阳性对照模板DNA 目前临床上由于MRS的出现致使感染趋势不断上升,多重耐药性增加,现有的抗生素很难控制这些耐药菌株的感染,给临床上的治疗带来的困难。正确快速的检测MRS并找出有效控制其感染的药物,是目前临床微生物工作的任务之一。MRS检测方法有核酸探针技术――PCR检测法,ⅥTEK仪器测定最低抑菌浓度(MIC)和CLSI推荐鉴定的葡萄球菌的头孢西丁纸片扩散试验等方法。为了寻找出适合基层医院实验室检测耐药性的简单而又可靠的方法,我们用头孢西丁纸片扩散法和甲氧西林微量稀释法与mecA基因的PCR检测法进行了比较,并评价了它们的可靠性与临床应用价值。本试验结果显示三种方法差异无显著性,所以此三种方法均为检测MRS的可靠方法。
本文中PCR检测mecA基因方法被公认为检测葡萄球菌的“金标准”,其具有快速、简便、特异性强和敏感性好的特点。并能够检测出异质性耐药的菌株,但由于PCR扩增仪等仪器设备的限制,在基础常规实验不易开展。而ⅥTEK仪器测定甲氧西林MIC方法虽然操作简单,但由于需要ⅥTEK仪器,在基层医院实验室也不易开展。头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性均较高,实验条件无特殊要求,且由于头孢西丁属头霉素类抗生素,对金黄色葡萄球菌产生的β-内酰胺酶稳定,并且与金黄色葡萄球菌的PBP4有高亲和性,可检测低水平、异质性耐药MRS菌株,因此临床实验室可常规使用头孢西丁纸片扩散法进行MRCNS筛检。
综合本实验所用的3种检测方法,均可作为检测MRS的可靠方法,但从操作过程,仪器设备,实验条件,结果敏感性和特异性综合考虑基层临床实验室可常规使用头孢西丁进行MRS的进行筛选。
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